国家药品监督管理局

国家药品标准

WS₁-XG-       -2002

纤溶酶
Xianrongmei
Fibrinogenase

本品系长白山眉蝮蛇（Agkistrodon halys）蛇毒中提取的蛋白水解酶，每1mg蛋白中纤溶酶活力不得少于800单位。

【性状】 本品为白色至类白色冻干块状物和粉末，有引湿性。

本品易溶于水。

【鉴别】 （1）取本品适量，加水制成每1ml中含0.1mg的溶液，取1ml置试管中，加0.4mol/L碳酸钠溶液1ml，再加福林试液1ml，置水浴中加热，溶液应呈蓝色。

（2）取本品，照电泳法（中国药典2000年版二部附录Ⅴ F 第五法）测定。

标准蛋白溶液的制备 取分子量测定用标准蛋白（分子量范围1～10万）适量，加供试品缓冲液（取水4.8ml，浓缩胶缓冲液1.2ml，甘油1.0ml，10％十二烷基硫酸钠溶液2.0ml，0.5％（W/V）溴酚蓝溶液0.5ml，β-巯基乙醇0.5ml，混匀。）制成每1m l中含1m g蛋白的溶液。临用前置水浴中5分钟，冷却。

供试品溶液的制备 取本品适量（按蛋白含量计算），加供试品缓冲液制成每1m l中含2m g蛋白的溶液，临用前置水浴中5分钟，冷却。

测定法 照电泳法（中国药典附录Ⅴ F第五法考马斯亮蓝染色）试验，采用垂直板电泳，各孔加5～10m l的供试品溶液或标准蛋白溶液，考马斯亮蓝染色。以标准蛋白分子量的对数为纵座标，以迁移率为横座标，进行线性回归，由标准曲线上求得供试品的分子量。

本品分子量应为24000～34000。

【检查】 纯度 （1）在【鉴别】（2）项下的试验中，供试品溶液应呈单一电泳带。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录Ⅴ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验 用凝胶色谱柱（TSK2000 7.8×300mm，5m m），以0.2mol/L磷酸钠缓冲液（pH6.8）为流动相，检测波长280nm。理论板数按纤溶酶峰计算应不得低于3000。

测定法 取本品用流动相稀释成每1ml中含1mg蛋白的溶液作为供试品溶液，取供试品溶液20m l注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，供试品中主峰相对百分含量不得低于90.0％。

过敏试验 取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含2单位的溶液，作为致敏液与供试品溶液。

取体重250～350g豚鼠6只，间日腹腔注射供试品溶液0.5ml，连续3次，然后将动物分

成两组，每组3只，分别在第一次注射后第14日及第21日静脉注射供试品溶液1.0ml。注射后15分钟内，均不得出现过敏性反应。如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽3声等现象中的两种以上者；或啰音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者，应判为阳性。

出血毒 取本品，加氯化钠注射液制成每1ml含4单位的溶液作为供试品溶液，取体重18～22g的小白鼠5只，背部皮下注射供试品溶液0.1ml，注射后24小时处死动物，剥皮观察，小鼠背部不得有出血现象。

神经毒 取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含100单位的溶液，作为供试品溶液，取体重300～500g的鸽3只，剂量按体重每1kg注射供试品溶液0.5ml，静脉给药，观察24小时，动物不得出现抽搐、死亡，如3只鸽中有一只出现抽搐或死亡，应另取鸽5只复试，均不得出现死亡。

【比活力测定】 效价测定 （1）试剂的配制 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.8）：取三羟甲基氨基甲烷2.42g，氯化钠4.06g，加水400ml溶解，用4mol/L盐酸溶液调pH至7.80，加水至500ml。

实验缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.8）、0.7％氯化钙溶液和0.9％氯化钠溶液以1:2:4体积混匀，即得。

凝血酶溶液 取凝血酶，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.8）溶解并稀释至每1ml中含5单位的溶液。

纤维蛋白原溶液 取纤维蛋白原，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.8）溶解并定量稀释至每1ml中含可凝固蛋白约5.0mg的溶液。

（2）供试品溶液的制备 取本品适量，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.8）溶解并定量稀释至每1ml中含15单位的溶液。

（3）测定法 取离心管，各精密加入实验缓冲液0.2ml，供试品溶液0.1ml，置37℃水浴预热2分钟，加凝血酶溶液0.1ml，纤维蛋白原溶液0.1ml，立即振摇数秒，混匀，置37℃水浴准确反应30分钟，置冰水浴中终止反应，离心（14000转/分钟）4分钟，纤维蛋白成片状贴于离心管底部，小心吸出液体，用水1～2ml洗涤并离心（14000转/分钟）4分钟，同法操作3次，小心将液体吸干，在残留物中精密加入0.2mol/L氢氧化钠溶液3ml，水浴加热8分钟，待纤维蛋白完全溶解，冷却后，以0.2mol/L氢氧化钠溶液为空白，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录Ⅳ A），在280nm波长处测定吸收度A。同时以三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.8）0.1ml代替供试品溶液同法操作测得A_S，作为空白对照。按下式计算供试品的活力单位

                                    [A_S-A]×W_S×n
        每1mg的供试品活力（单位）-----------------
                                    A_S×0.1×30×W

式中 A_S为空白对照的吸收度；

A为供试品溶液的吸收度；

W_S为纤维蛋白原溶液0.1ml中含可凝固蛋白的μg数；

n为供试品稀释倍数；

0.1为供试品溶液容积，ml；

30为反应时间，分钟；

W为供试品取样量，mg。

纤溶酶活力单位定义：在上述条件下，1分钟溶解1μg纤维蛋白（可凝固蛋白）为一个纤溶酶活力单位。

蛋白含量 取本品适量，加水制成每1ml中约含0.15mg蛋白的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1.0ml，照附件“福林酚测定法”测定，计算每1mg供试品中的蛋白量（mg）。

【类别】 抗凝血药。

【贮藏】 遮光，密封，冷暗处保存。

【制剂】 （1）纤溶酶注射液 （2）注射用纤溶酶

【有效期】 暂定2年