三、疫苗的生产工艺研究
　　（一）生产用菌毒种批的遗传稳定性分析
　　确定工作种子批和疫苗代次的菌毒株主要保护区域核苷酸及氨基酸序列在传代过程中发生改变的频率。生产用菌毒种、细胞和涉及生产的工艺技术应注意专利，应进行相关专利查询。
　　（二）生产用细胞和/或培养基
　　1．生产用细胞应符合现行版《中国药典》中“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”的要求，除原代细胞外，采用其他细胞系应建立细胞库。
　　2．生产用培养基尽可能避免使用动物来源和可能引起人体不良反应的原材料，禁止使用来自疯牛病疫区的牛源性原材料。
　　（三）疫苗生产工艺的研究
　　生产工艺需进行验证。对疫苗生产中菌毒种代次、菌毒种接种量、收获次数、灭活工艺及验证、半成品配制、分批等要求，应按现行版《中国药典》执行。
　　1．原液生产的主要技术参数的确定
　　（1）病毒与细胞的接种比例或者MOI的最佳参数、细胞培养和病毒培养的最佳温度、培养时间和收获时间等条件。菌毒种的接种量、培养和发酵条件等技术参数。
　　（2）灭活剂的选择和依据。
　　（3）灭活、裂解、减毒或脱毒效果的验证。效果验证的依据、方法，应采用尽可能敏感的细胞或培养基和方法进行。
　　（4）原液的浓缩和/或活性抗原的提取纯化等工艺研究：应对纯化和提取工艺中各种条件进行优化，确定纯化和提取工艺对抗原活性成分是否影响；应建立稳定的纯化工艺，包括纯化时的回收率、抗原活性和纯度等的稳定性，并制定相应的质控指标和检测方法。
　　（5）初步确定起始投料、原液、半成品和成品的产出比的数据。
　　2．对佐剂的要求
　　新型疫苗应用的佐剂包括3类：分别为目前常用的铝佐剂；批准用于某些疫苗的佐剂如MF59等；新开发研制尚未用于疫苗特别是预防性疫苗的佐剂如CpG等。一般情况下，抗原量及免疫原性能满足免疫保护的需要，则不使用佐剂为宜。
　　（1）是否选择铝佐剂，应根据疫苗抗原的免疫原性、抗原与佐剂最优配比等综合考虑。应注意不同种类抗原与铝佐剂制备疫苗后，铝佐剂对抗原的免疫增强作用可能有所差异，甚至不同制备批的铝佐剂之间也有不同。
　　（2）对其他已经批准用于上市疫苗的佐剂，只需提供该类制剂的组分或化学组成，国内外使用该类制剂的情况，无需对该佐剂再单独进行毒理和安全性研究，但应对疫苗成品进行严格的安全性研究，获得新型疫苗中佐剂的安全性资料。
　　（3）若国内外均未使用过该类佐剂,则必须对其作用原理、安全性及佐剂效应进行详细的研究并建立切实可行的评价方法。
　　（四）疫苗的配方研究
　　应对疫苗的配方进行研究，如疫苗中添加的稳定剂、缓冲液、以及赋形剂等是否对疫苗的免疫原性和安全性造成影响。